ترانسفکشن رده سلولی pc۱۲ بوسیله وکتور بیانی -nt۴ pegfpniو بررسی بیان پروتئینی آن

نویسندگان

مریم سادات خرمگاه

maryam sadat khoramgah دکتر علی اصغر کرامتی نیا

ali asghar keramati nia department of social medicine, school of medicine, shahid beheshti university of medical sciences, tabnak ave, daneshjou blvd, velenjak ave, tehran, iran.تهران، بزرگراه چمران، ولنجک، خیابان تابناک، بلوار دانشجو، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، دانشکده پزشکی، گروه پزشکی اجتماعی دکتر نصرت اله ضرغامی

nossrat allah zarghami دکتر محمدحسن کریم فر

mohamad hassan karim far دکتر سید مجتبی محدث اردبیلی

چکیده

سابقه و هدف: یکی از تکنیک های پایه ای مهم برای مطالعه یک پروتئین اختصاصی در بیولوژی مولکولی، کلون کردن و بیان آن در سلول می باشد. از جمله روشهای منتقل کردن ژن، روشهای غیر ویروسی است که کم هزینه تر، آسانتر و ایمنتر می باشند. یکی از ژن های مهم که کاربردهای بالینی فراوانی دارد ژن nt4 است. این ژن یکی از اعضای خانواده نوروتروفیک است و در سلول های گلیال سیستم اعصاب محیطی و مرکزی بیان می شود. این نوروتروفین در بیان ژنی، بقا و تمایز رده های مختلف نورونی شرکت دارد. هدف از انجام این پژوهش، ساب کلونینگ و ترانسفکت این ژن به منظور مطالعه و دسترسی بیشتر با توجه به نیاز به این فاکتور نوروتروفیک در فعالیتهای ژن درمانی است. مواد و روشها: در این تحقیق، ژن nt4 با روش pcr در پلاسمید pcmv-sport6کلون گشته و پس از آن در باکتری اشرشیاکلی سوش dh5-α ترانسفورم شد. پلاسمید نوترکیب از باکتری میزبان استخراج و ژنnt4 با استفاده از آنزیم not i ,sal iاز پلاسمید جدا گردید. در مرحله بعد پلاسمید برای پذیرش قطعه nt4 و انجام کلونینگ با آنزیم hind iii برش داده شد و ژن nt4 درون پلاسمید pegfp-ni ساب کلون شد. محصول واکنش اتصال در باکتری فوق ترانسفورم و در محیط lb حاوی آمپی سیلین کشت داده شد. پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از کیت استخراج پلاسمید، از باکتری تخلیص و در مرحله بعد در سلول pc12 ترانسفکت گردید و در خاتمه بیان پلاسمید نوترکیبب با روشsds page ,western blotting مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد پلاسمید ژن مورد نظر حاوی توالی صحیحی بوده و تطابق کامل با توالی ژن مورد نظر در بانک ژن دارد. در آنالیز پروتئین های جدا شده از سلول های ترانسفکت شده با روش sds-page، باندی حدود 45 کیلودالتون مشاهده شد که با آنتی بادی مونوکلونال در آنالیز وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت. نتیجه گیری: این پلاسمید به دلیل ساختار صحیح، جهت انتقال به سیستم یوکاریوتی و ارزیابی بیان مناسب می باشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

ترانسفکشن رده سلولی PC12 بوسیله وکتور بیانی -NT4 pEGFPNIو بررسی بیان پروتئینی آن

سابقه و هدف: یکی از تکنیک‌های پایه‌ای مهم برای مطالعه یک پروتئین اختصاصی در بیولوژی مولکولی، کلون کردن و بیان آن در سلول می‌باشد. از جمله روشهای منتقل کردن ژن، روشهای غیر ویروسی است که کم‌هزینه‌تر، آسانتر و ایمنتر می‌باشند. یکی از ژن‌های مهم که کاربردهای بالینی فراوانی دارد ژن NT4 است. این ژن یکی از اعضای خانواده نوروتروفیک است و در سلول‌های گلیال سیستم اعصاب محیطی و مرکزی بیان می‌شود. این نورو...

متن کامل

القاء بیان مداوم سیکلواکسیژناز-2 در رده سلولی سرطان سینه از طریق ترانسفکشن آن ها با پلاسمید pSG5-COX-2

Background and purpose: One of the major problems in chemotherapy is resistance to anti-cancer drugs. Recent studies have demonstrated a relationship between cyclooxygenase-2 (COX-2) expression and progression of multidrug resistance (MDR). One of the proteins involved in drug resistance is ABCG2 (ATP-binding cassette sub-family G member 2) that is often overexpressed in patients with cancer. T...

متن کامل

همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293

چکیده سابقه و هدف CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی‌که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می‌کند، به ‌نظر می‌رسد فرم مالتی‌‌مری آن بتواند اثر قوی‌تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر ‌این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پر...

متن کامل

کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB هلیکوباکتر پیلوری با استفاده از وکتور بیانی pcDNA3.1(+)

مقدمه: هلیکوباکتر پیلوری عامل بیماری هایی مانند گاستریت، زخم های گوارشی و سرطان غدد لنفاوی و دستگاه گوارشی است. هنوز واکسن موثری علیه هلیکوباکتر پیلوری تولید نشده است. آنزیم اوره آز یکی از عوامل مهم تحریک سیستم ایمنی میزبان است. بنابراین هدف این تحقیق کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد. روش کار: در این بررسی تجربی، ژن کد کننده ی ureB از ژنو...

متن کامل

طراحی و ساخت وکتور بیانی اختصاصی کراتینوسیت های اپیدرمو بررسی بیان فاکتورIX انسانی به عنوان مدل

  چکیده   سابقه و هدف   کراتینوسیت یک مدل مناسب برای بیان ژن به صورت ex vivo برای رهاسازی سیستمیک پروتئین است. با توجه به این نکته عناصر کنترلی اختصاصی کراتینوسیت‌ها، گزینه‌های مناسبی برای بیان ژن با واسطه کراتینوسیت‌ها هستند. در پژوهش حاضر یک وکتور برای بیان اختصاصی پروتئین‌های نوترکیب در کراتینوسیت‌های اپیدرم با استفاده از پروموتر ژن کراتین‌ـ‌ 14 انسانی طراحی گردید. توانایی پلاسمید ساخته‌شده ...

متن کامل

طراحی و ساخت وکتور بیانی اختصاصی کراتینوسیت های اپیدرمو بررسی بیان فاکتورix انسانی به عنوان مدل

چکیده   سابقه و هدف   کراتینوسیت یک مدل مناسب برای بیان ژن به صورت ex vivo برای رهاسازی سیستمیک پروتئین است. با توجه به این نکته عناصر کنترلی اختصاصی کراتینوسیت ها، گزینه های مناسبی برای بیان ژن با واسطه کراتینوسیت ها هستند. در پژوهش حاضر یک وکتور برای بیان اختصاصی پروتئین های نوترکیب در کراتینوسیت های اپیدرم با استفاده از پروموتر ژن کراتین ـ 14 انسانی طراحی گردید. توانایی پلاسمید ساخته شده به ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
پژوهنده

جلد ۱۷، شماره ۲، صفحات ۹۱-۹۷

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023